细胞实验室建设

细胞实验室建设

细胞实验室建设简要说明     

    组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因素的影响。目前,超净工作台的广泛使用,很大程度上方便了组织细胞培养工作,并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。

一、常规细胞培养室的设置和设施

1. 无菌操作室:

    由更衣间,缓冲间和操作间三部分组成

    ⑴更衣间:位于培养室外部,用于更换洁净的衣帽鞋口罩。放置消毒的防护服、衣帽柜、鞋柜。

    ⑵缓冲间:位于更衣间与操作间之间,目的是为了保证操作间的无菌环境。放置电冰箱、液氮灌、消毒好的无菌物品等。 

    ⑶操作间:位于内部,专用于无菌操作、细胞培养。放置净化工作台及二氧化碳培养箱,离心机,倒置显微镜等。

    房间要求:独立房间,按洁净厂房要求建造,并需要保持空气消毒和清洁无尘:

    紫外线灯—产生臭氧,并且室内温度及湿度均较高,不利于工作人员健康。

空气过滤的恒温恒湿装置—-,空气洁净度级别如下:

    注:空气洁净度级别表:一般普通培养室常选用100000级的

2. 准备室:常设置在无菌操作室外部,主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。主要设置:离心机、水浴锅、定时钟表、普通天平及日常分析处理物

3. 洗刷消毒间:要和其他区域分开,独立一室,主要用于各种培养器皿的清洗、准备和消毒,常设置:烘箱、高压蒸汽消毒锅、去离子水或者蒸馏水处理器、酸缸、水槽刷子等。 

二.常用的基本设备

1. 仪器:

   1). 超净工作台:操作简单,安装方便,占用空间小且净化效果很好。一般细菌培养室使用的净化工作台主要有两种:a)侧流式或称垂直式 b)外流式或称水平层流式。

    净化工作台工作原理(大致相同)—-通常是将室内空气经粗过滤器初滤,由离心风机压入静压箱,再经高效空气过滤器精滤,由此送出的洁净气流以均匀的断面风速通过无菌区,从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。

    侧流式工作台—-空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧,也有从上向下或从下向向对侧,形成气流屏障保持工作区无菌。工作台结构为封闭式。

    外流式(水平式)工作台—-净化后的空气面向操作者流动,因而外方气流不致混入操作,但进行有害物质实验操作则对操作者不利。工作台结构为开放式。

    2). 显微镜:倒置荧光显微镜,若有条件,尚可配置带有照相系统的高质量相差显微镜、解剖显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等,以便随时观察、记录、摄影细胞生长情况。

    3). CO2培养箱:CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的量的CO2(常用浓度为5%),易于使培养液的pH保持稳定,适用于开放或半开放培养。

    4). 干燥箱:电热干燥箱升温较高,一般需达到160℃以上。

    5). 水纯化装置:产生去离子水,可用三蒸水替代。

    6). 冰箱:低温冰箱(-20℃)、超低温冰箱(-70,80C,)

    7). 液氮罐:选择购置液氮容器时要综合考虑容积大小,取放使用方便及液氮挥发量(经济)三种因素。液氮容器的大小可自25L～500L,可以储存1ml的安瓿250～15000个左右。液氮温度可低达-196℃,使用时应防止冻伤。由于液氮不断挥发,应注意观察存留液氮情况,及时定期补充液氮,避免挥发过多而致细胞受损。

    8). 离心机:进行细胞培养时,常规需要进行制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等工作,通常需要使用离心机。

    9). 精密电子天平:常用的有扭力天平、精密天平及各种电子天平。

    10). 消毒器:直接或间接与细胞接触的物品均需消毒灭菌处理。

    11). 滤器:目前细胞培养工作中采用的培养用液,包括人工合成培养液、血清、消化用等常含有维生素、蛋白、多肽、生长因子等物质,这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能,因而上述液体多采用滤过消毒以除去细菌。

2. 常用的培养器皿:

    1). 培养瓶:由玻璃或塑料制成。主要用于培养、繁殖细胞。进行培养时培养瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞,胶塞多用于密封培养。国产培养瓶的规格以容量(ml)表示,如250ml、100ml、25ml等;进口培养瓶则多以底面积(cm2)表示。

    2). 培养皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁殖等实验使用。常用的培养皿规格有10、9、6cm、3.5cm等。

    3). 多孔培养板:为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂,可同时测试大量样本,易于进行无菌操作。培养板分为各种规格,常用的规格有:96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。

    4). 培养操作有关的器皿:

      a). 贮液瓶:主要用于存放或配制各种培养用液体如培养液、血清及试剂等。贮液瓶分为各种不同规格,如1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、5ml等。

      b). 吸管:主要分为刻度吸管、无刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、转移液体,常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等规格。无刻度吸管分为直头吸管及弯头吸管,除可以作吸取、转移液体外,弯头尖吸管还常用于吹打、混匀及传代细胞。

      c). 加样器(移液器):用于吸取、移动液体或滴加样本。可根据需要调节量的大小,吸量准确、方便。尤以微量加样器,可保证实验样品(或试剂)含量,重复性良好。目前,可高温消毒的,多通道的各类移液器可供使用者选择,能确保加样准确、快速、方便并且达到无菌要求。

      d). 其他用品:尚有收集细胞用的离心管,放置试剂或临时插置吸管用的试管,装放吸管以便消毒的玻璃或不锈钢容器,用于存放小件培养物品便于高压消毒的铝制饭盒或贮槽,套于吸管顶部的橡胶吸头,封闭各种瓶、管的胶塞、盖子、冻存细胞用的安瓿或冻存管、不同规格的注射器、烧杯和量筒以及漏斗,超净工作台使用的酒精灯,供实验人员操作前清洁消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型喷壶等。